مشکلات و راه حل های سنتز طولانی پپتید

در تحقیقات بیولوژیکی معمولاً از پلی پپتیدهایی با توالی طولانی استفاده می شود.برای پپتیدهایی با بیش از 60 اسید آمینه در توالی، بیان ژن و SDS-PAGE به طور کلی برای به دست آوردن آنها استفاده می شود.با این حال، این روش زمان زیادی می برد و اثر جداسازی محصول نهایی خوب نیست.

چالش ها و راه حل ها برای سنتز طولانی پپتید

در سنتز پپتیدهای بلند همیشه با مشکلی روبرو هستیم، یعنی مانع فضایی واکنش تراکم با افزایش توالی در سنتز افزایش می یابد و زمان واکنش نیاز به تنظیم دارد تا واکنش کامل شود.با این حال، هر چه زمان واکنش طولانی تر باشد، عوارض جانبی بیشتری ایجاد می شود و بخشی از پپتید هدف تشکیل می شود.این گونه باقیمانده ها - زنجیره های پپتیدی کمبود ناخالصی های کلیدی تولید شده در سنتز پپتید طولانی هستند.بنابراین، در سنتز پپتید طولانی، مشکل کلیدی که باید بر آن غلبه کنیم، کشف شرایط واکنش با کیفیت بالا و روش‌های واکنش است تا واکنش تراکم اسید آمینه را جامع‌تر و کامل‌تر کنیم.علاوه بر این، زمان واکنش را کاهش دهید، زیرا هر چه زمان واکنش طولانی‌تر باشد، واکنش‌های جانبی غیرقابل کنترل بیشتر، محصولات جانبی پیچیده‌تر می‌شوند.بنابراین، سه نکته زیر به طور خلاصه بیان می شود:

می توان از سنتز مایکروویو استفاده کرد: برای برخی از اسیدهای آمینه ای که در فرآیند سنتز با آنها مواجه می شوند و ترکیب آنها آسان نیست، می توان از سنتز مایکروویو استفاده کرد.این روش نتایج قابل توجهی دارد و زمان واکنش را بسیار کاهش می دهد و تشکیل دو محصول جانبی کلیدی را کاهش می دهد.

می توان از روش سنتز قطعه استفاده کردزمانی که سنتز برخی از پپتیدها با روش‌های سنتز رایج دشوار است و خالص‌سازی آنها آسان نیست، می‌توانیم کل تراکم چندین اسید آمینه را در یک بخش معین از پپتید به زنجیره پپتیدی به‌عنوان یک کل بپذیریم.این روش همچنین می تواند بسیاری از مشکلات در سنتز را حل کند.

می توان از سنتز آسیل هیدرازید استفاده کرد: سنتز پپتیدهای آسیل هیدرازید روشی برای سنتز فاز جامد پپتید N ترمینال Cys و پلی پپتید C ترمینال هیدرازید واکنش شیمیایی انتخابی بین تشکیل پیوندهای آمیدی برای رسیدن به روش پیوند پپتیدی است.بر اساس موقعیت Cys در زنجیره پپتیدی، این روش کل زنجیره پپتیدی را به چند توالی تقسیم کرده و به ترتیب آنها را سنتز می کند.در نهایت، پپتید هدف از طریق واکنش تراکم فاز مایع به دست می آید.این روش نه تنها زمان سنتز پپتید طولانی را تا حد زیادی کاهش می دهد، بلکه خلوص محصول نهایی را نیز به میزان قابل توجهی افزایش می دهد.

تصفیه پپتید طولانی

خاص بودن پپتیدهای بلند به ناچار به اجزای پیچیده پپتیدهای خام منجر می شود.بنابراین، خالص سازی پپتیدهای طولانی توسط HPLC نیز چالش برانگیز است.سری آمیلوئید از فرآیند تصفیه پلی پپتیدی، جذب تجربه زیادی و با موفقیت در تصفیه پپتید طولانی استفاده می شود.با اتخاذ تجهیزات جدید، اختلاط سیستم‌های تصفیه چندگانه، جداسازی مکرر و سایر روش‌های تجربه، میزان موفقیت تصفیه طولانی پپتید بسیار بهبود یافت.